破碎细胞和灭活RNA酶同步施行的办法

更新时间：2012-05-16

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用猛烈改变性别如盐酸胍或硫氰酸胍溶液能迅疾溶解氨基酸，造成细胞结构破碎，核蛋白因为其二级结构的毁伤而从核酸上解离下来。RNA酶可耐受多种处置等，因为这个可联用上面所说的试药，从团体中，如富含RNA酶的胰腺中，提出取得完整无缺的RNA。下述实验手续系列利用RNA酶制约剂和（或）能迅疾灭活RNA酶的相关办法从团体或细胞培育物中离合总RNA、核内RNA和胞质内RNA.

这一从培育的单层哺乳动物细胞中离合RNA的实验手续系为Favaloro 等（1980）所绍介手续的改良。该手续一样适合使用于从悬浮培育的哺乳动物细胞中或从便于散布成单个细胞的哺乳动物团体中离合RNA.但不舒服合使用于从固体团体中提出取得RNA,由于用这种裂解细胞的办法（在SDS存在的条件下用蛋白酶K克化）去克化团体速度很慢，造成内源性RNA酶在被蛋白酶K克化或被制约剂灭活前有时候间施展效用。原方案中（Favaloro等。1980）认为合适而使用的裂解缓和冲突液包括0.015 （W/V）的Macaloid（硅藻土），用于吸附并灭活RNA酶。尽管现仍有Macaloid卖出NL Chemicals），但氧气钒核糖核苷复合物和RNA酶的氨基酸制约剂更常用。下述手续的长处是速度快，并能同时处置众多样品。